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Métrologie thermique et optique PCR et qPCR

Notre laboratoire d’essai est accrédité pour la caractérisation sur site des thermocycleurs qPCR et point final ainsi que des incubateurs à sec, numéro d’accréditation 1-5664, voir portée sur www.cofrac.fr.

Nous proposons des solutions pour la majorité des instruments (mêmes fermés Applied 7300 ; 7500 ; 7900 ; StepOnePlus ; SetpOne ; Stratagene MX3000P ; MX3005P ; Roche LightCycler capillaire ; Bio-Rad CFX 96 ; LC480 , Rotorgene , SmartCycler, SaCycler) de tous les formats allant de 24 à 384 puits.

*PCR point final et QPCR

Pourquoi faire cette vérification :

  • retour sur investissement
  • Maitrise de vos appareils
  • Bon diagnostic
  • Maîtrises des couts ( réduction des réplications : réactifs, consommables, temps opérateur, nouvelles extractions )
  • Obligations normatives

Nous interprétons vos résultats avec la traduction des résultats métrologiques vers la biologie moléculaire et l’influence sur l’amplification.

**A. Vérification thermique

Nous proposons deux types de prestations :

  • Service de validation sur site
  • Vente de l’outil d’auto test Driftcon

Ces deux systèmes de vérification ont une incertitude totale de mesure de l’ordre de 0.20°C pour les systèmes fermés et 0.27°C pour les systèmes ouverts et comprend l’incertitude de l’étalonnage du système de mesure + l’incertitude de la mesure de la température.
Différents paramètres sont calculés lors de l’acquisition des températures :
La précision en température (c’est la moyenne des températures prises par l’ensemble des sondes à une température donnée).

L’uniformité en température donnée à 5s/10s/15s/30s/60s/90s selon la durée du plateau (L’uniformité est la différence entre la zone la plus chaude et la zone la plus froide et permet de savoir si vos échantillons sont traités de la même manière sur l’ensemble du bloc).

Les overshoots sont des dépassements de la température de consigne.

Les undershoots sont des abaissements de température par rapport à la température de consigne.

Durée de maintien du plateau en secondes. La référence de temps est donnée par l’horloge de l’ordinateur d’acquisition. Les débuts de plateau sont déterminés lorsque la moyenne des capteurs entre dans un offset de 1°C par rapport à la température de consigne.

Vitesse des rampes de montée et de descente en température en C°/s.

***Caractérisation sur site

Nous utilisons une méthode dynamique pour vérifier vos thermocycleurs en utilisant soit un protocole standard soit des protocoles spécifiques en fonction de vos besoins et/ou obligations normatives.
Nos outils de contrôle sont étalonnés annuellement par un laboratoire accrédité ISO 17025 en multipoints (30°C/60°C/90°C/95°C).
Nous utilisons 16 sondes thermiques de type thermistance

Sonde format plaque pour les appareils fermés Sonde pour Rotorgene
La verification se fait couvercle fermé et nous vous donnons la température du couvercle dans le rapport.
Les sondes sont adaptées à la géométrie de vos instruments. La disposition des capteurs se fait en fonction du format du bloc.
La fréquence d’acquisition des données est de 4 températures/seconde.
La résolution du système est de 1/100éme.
Nous pouvons intervenir 1 fois par an ou plus selon la fréquence d’utilisation de votre appareil.
Nous délivrons un rapport métrologique (téléchargeable) et une interprétation des résultats après la vérification de l’appareil. Une assistance téléphonique est disponible pour vous répondre à des questions supplémentaires et vous aider à comprendre vos résultats.

- Vérification selon XP U 47 600 et V03-112
Dans le cadre des normes XP U 47 600 et V03-112 nous contrôlons les protocoles que vous utilisez. Nous procédons au control de 3 cycles de PCR aléatoirement durant toute la durée de la réaction de PCR pour la norme destinée à la santé animale et de 10 cycles pour la norme destinée aux pathogènes alimentaires.

- Vérification selon ISO 17 025 et ISO 15 189
Généralement nous utilisons un protocole standard pour nos clients accrédités ISO 17025 ou ISO 15189. Mais selon vos besoins nous pouvons procéder à la vérification de vos températures en utilisant un protocole plus spécifique.

***Formation sur site

Nous proposons des formations dédiées aux laboratoires devant gérer des parc d’instruments de PCR point final et temps réel :
Rappels sur la structure des instruments ; déviations ; détermination des EMT ; impact biologique des déviations ; confirmation biologique des conformité ; obligation normatives (voir plaquette PDF sur cette page).

**B. Control Optique

Ce système de vérification physique du contrôle de la partie optique est disponible. Il permet le contrôle des systèmes optiques des instruments de PCR temps réel 96 puits :

  • ABI 7500 fast 96 well
  • ABI 7500
  • QuantStudio 5
  • Roche 480 96 well
  • Roche LC 96
  • Bio-Rad CFX 96 well
  • Stratagene MX 3005P
  • Liste non exhaustive ...
    Cette métrologie permet de qualifier les lentilles ; les miroirs et trajets optiques ; les tolérances mécaniques de l’instrument ; le capteur optique et sa sensibilité.
    Les paramètres traités : la justesse et l’homogénéité des CTs ; la saturation optique ; la linéarité ; la justesse et l’homogénéité des courbes de fusion ; Ratio Tm ; facteur de sensibilité.
    Le contrôle dure environ 1h10 à 1h40, il comporte une phase linéaire puis de croissance exponentielle du signal, une phase de saturation suivie d’une courbe de fusion.

**C. Vente de l’outil de l’auto-control : Driftcon

Cet outil est une batterie de sondes adaptée à votre thermocycleur.
Couplé à un logiciel d’acquisition de données, il vous délivre un rapport pour la validation de conformité avec les normes constructeur
Nos bases de données vous donnent une comparaison des performances par rapport aux instruments du même modèle.
L’outil doit être ré-étalonné tous les deux ans ou toutes les 250 mesures. Nous proposons lors du réétalonnage de votre chaîne de mesure soit un ré-étalonnage mono point soit (90°C) soit un ré-étalonnage multipoints (30°C/60°C/90°C/95°C).